Glutatyon Redüktaz Enziminin İskorpit Balığı (Scorpaena Porcus) Karaciğer Dokusundan Saflaştırılması ve Bazı Ağır Metal İnhibisyon Kinetiklerinin İncelenmesi Glutatyon Redüktaz Enziminin İskorpit Balığı (Scorpaena Porcus) Karaciğer Dokusundan Saflaştırılması ve Bazı Ağır Metal İnhibisyon Kinetiklerinin İncelenmesi

Abstract

Çalışmamızda iskorpit balığı (Scorpaena porcus) karaciğer dokusundan glutatyon redüktaz saflaştırıldı ve ağır metal iyonlarının enzim aktivitesi üzerindeki etkileri belirlendi. Saflaştırma süreci üç aşamadan oluşuyordu; homojenatın hazırlanması, amonyum sülfat çöktürmesi ve afinite kromataografisi saflaştırması. Bu aşamaların sonunda 10. 479 EÜ/mg protein spesifik aktivitesine sahip enzim %28.3 verimle 25.9 kat saflaştırıldı. Optimizasyon sonuçları, optimum pH: 6.5, optimum substrat konsantrasyonu 0.3 mM NADPH ve optimum tampon 300 mM KH2PO4 olarak bulundu. Saflaştırma işleminin sonrasında Mn2+, Cd2+, Ni2+ ve Cr3+ ağır metallerin inhibisyon etkileri araştırıldı. Ağır metallerin IC50 değerleri sırasıyla 2.4 µM, 30 µM, 135 µM ve 206 µM olarak hesaplandı.In the current syudy, glutathione reductase was purified from Scorpion fish (Scorpaena porcus) liver tissue and the effects of heavy metal ions on the enzyme activity were determined. The purification process consisted of three stages; preparation of the homogenate, ammonium sulfate precipitation and affinity chromatography purification. At the end of these steps, the enzyme was purified 25.9-fold with a specific activity of 10,479 EU/mg and a yield of 28.3 %. The optimum pH was found to be 6.5, optimum substrate concentration was 0.3 mM NADPH and optimum buffer was 300 mM KH2PO4. After purification, inhibition effects of Mn+2, Cd+2 , Ni+2, and Cr+3, as heavy metal ions were investigated. IC50 values of the heavy metals were calculated as 2.4 µM, 30 µM, 135 µM and 206 µM, respectively.