Protein Kaynaklarının in Vitro Olgunlaştırılmış Sığır Oositlerinin Glutatyon Peroksidaz Enzim Aktivitesi Üzerine Etkisi

Abstract

Bu çalışma, sığır oositlerinin in vitro olgunlaştırma (IVO)’sında kültür medyumuna ilave edilen protein kaynaklarının glutatyon peroksidaz (GPx) enzim aktivitesi üzerine etkisinin belirlenmesi amacıyla yapılmıştır. Sığır ovaryumlarından elde edilen oositler %10 fötal buzağı serum (FBS), 4 mg/mL sığır serum albümin (SSA), 1 mg/mL polivinil alkol (PVA) içeren ve protein kaynağı içermeyen bikarbonat tamponlu doku kültür medyumlarında (TCM–199) 38,5 °C sıcaklıkta ve %5 CO2 içeren nemlendirilmiş ortamda 22 saat IVO’ya alınmıştır. Olgunlaşma süresi sonunda elde edilen kumulus-oosit kompleksleri (KOK'ler), kumulus hücrelerinden ayırmak için işleme tabi tutulmuştur. Kumulus hücrelerinden ayrılan oositler, polivinil alkol içeren ve Ca2+ ve Mg2+ içermeyen fosfat tamponlu tuz çözeltisi (PBS) ile yıkanmıştır. Daha sonra, oositler belirlenmiş örnek boyutlarına bölünerek mikrotüplerde saklanmıştır. IVO kültürü sonrasında oositlerdeki glutatyon peroksidaz (GPx) enzim aktivitesi için ticari kit kullanarak 340 nm dalga boyunda spektrofotometrik olarak belirlenmiştir. Çalışmada, her bir deneme grubundaki oositlerden izole edilen hücre ekstraktlarındaki GPx enzim aktivitesinin seviyelerinin zamanla değişmediği, kültür medyumuna PVA eklenmiş oositlerinde GPx enzim aktivitesinin diğer deneme gruplarındaki oositlerden daha düşük olduğu tespit edilmiştir (P>0,05). Bu çalışma sonucunda farklı protein kaynaklarının antioksidan aktivitenin göstergelerinden biri olan GPx enzim seviyelerinin sığır oositlerinde üzerine etkileri belirlenmiş ve FBS ve BSA’nın protein kaynağı olarak sığır oosit gelişimi üzerine daha etkili olabileceği tespit edilmiştir.